Использование прогестерона сыворотки крови длп регуляции времени овуляции у сук
В конце проэструса и начале эструса сывороточная концентрация эстрадиола-17р резко падает, что совпадает с выбросом лютеинизирующего гормона (ЛГ). Сывороточная концентрация прогестерона становится выше 1 нг/мл в день выброса ЛГ или за 2 дня до овуляции, когда фолликулы претерпевают предовуляционную лютеинизацию. Это падение соотношения эстроген/прогестерон сопровождается началом рецептивного поведения У сук.
Эструс, или охота определяется по поведению суки. Она становится в позу для вязки. Вульва может стать мягче, но не уменьшается в размерах. Выделения из вульвы варьируют по количеству и по цвету от серозогеморрагических до желтых. Происходит эксфолиация влагалищных эпителиальных клеток, которые ороговели в течение эструса. Эструс определяется цитологически, когда 50% клеток превратятся в безъядерные сквамозные клетки. Во влагалищных мазках могут присутствовать бактерии, ПМЛ отсутствуют. Эструс продолжается в среднем 9 дней с колебанием у здоровых сук от О до 21 дня.
Выброс Л Г начинается за 3 дня до начала эструса и заканчивается через 5 дней после начала эструса (Сопсаппоп etal., 1977: Сопсаппоп etal., 1989). Поскольку выброс ЛГ и последующая овуляция мало коррелируют с началом эструса, рецептивного поведения или цитологическими изменениями, то эти параметры не могут служить показателем времени овуляции у сук.
Вероятность зачатия намного выше, если суку повязать в период с 4-го дня до овуляции по 2-й день после овуляции, а максимальный помет можно получить при проведении вязки на 2-й день после овуляции. Суки могут забеременеть после одного осеменения на 2-3-й день после овуляции (HolstandPhemister, 1974). У суки происходит овуляция первичного ооцита, который должен претерпеть 2 мейотических деления перед оплодотворением. Этот процесс созревания занимает 48-72 часа. Зрелая яйцеклетка остается жизнеспособной 2-3 дня. Нормальный сперматозоид может жить в половых путях суки после естественного оплодотворения в течение 5-6 дней.
Измерение сывороточной концентрации ЛГ можно использовать для предсказания дня овуляции в течение астрального цикла. В коммерческих лабораториях выполняют радиоиммунный анализ (РИА) ЛГ, но он занимает слишком много времени, чтобы использовать его в клинической практике. Поскольку ЛГ является гликопротеиновым гормоном с уникальным для каждого вида животных строением, можно использовать анализ, специфичный для ЛГ собак. Для определения ЛГ собак широко применяется ферментный иммунносорбентный тест (ELISA). Преимуществом теста ELISA является простота его практического использования. Однако нет опубликованных данных о точности этого теста, к тому же краткость пиковых значений ЛГ требует постоянного тестирования крови, которое неудобно и дорого для владельцев собак.
Для предсказания дня овуляции также можно использовать сывороточную концентрацию прогестерона. В исследовании 49 сук измеряли сывороточную концентрацию прогестерона во время проэструса и эструса, успешного оплодотворения и беременности, затем результаты были опубликованы (JohnstonandRoot, 1995). Содержание прогестерона в сыворотке увеличивается при выбросе ЛГ, в этот день оно достигает 1,0-1,9 нг/мл (3,1-5,9 нмоль/л). На следующий день после выброса ЛГ или за 1 день до овуляции концентрация прогестерона достигает 2,0-3,9 нг/мл (6,2-12,1 нмоль/л). В день овуляции концентрация прогестерона равна 4,0-10,0 нг/мл (12,4-31,0 нмоль/л). После овуляции на месте каждого лопнувшего фолликула образуется желтое тело (ЖТ), которое начинает продуцировать прогестерон, поэтому его концентрация растет быстро и непредсказуемо. Она остается высокой до родов, достигая своего максимума в середине диэструса — 15-90 нг/мл.
В коммерческих лабораториях проводят РИА для определения сывороточной концентрации прогестерона. Поскольку прогестерон является стероидным гормоном и его структура одинакова у всех видов животных, поэтому для собак не нужен специальный анализ. РИА дают качественный результат. Поскольку сывороточная концентрация прогестерона предсказуемо растет во время выброса ЛГ и овуляции и затем продолжает оставаться высокой, не нужно ежедневных анализов крови. На практике осеменение сук свежей спермой проводят, когда концентрация вырастает в 2 раза за неделю. Нужно проконсультироваться в коммерческой лаборатории о взятии и транспортировке образцов, а затем ждать результатов анализа по факсу или телефону.
Для практического определения сывороточной концентрации прогестерона используют несколько наборов ELISA(Status-LH, Sybiotics, MalvernPA; PreMate, CamelotFarms, ColledgeSation, TX). Тесты ELISA дают количественный результат, изменения цвета являются показателем для различных значений. Сравнение РИА и ELISA показали плохую корреляцию между двумя методами, причем неточность ELISAсоставила от 9 до 47,1%. Наибольшая неточность приходится назначения от 1,5-3,0 нг/мл до 5,0-10,0 нг/мл (4,7-9,3 до 15,5-31,0 нмоль/л), то есть на ту концентрацию, которая важна для размножения собак. Набор ELISA более точен на верхнем пределе значений, больших 5,0-10,0 нг/мл (1,5-31,0 нмоль/л), здесь точность составляет 87,3-96,0%.
Основными рекомендациями по разведению животных будут следующие положения.
• Начало взятия цитологических образцов из влагалища на 4-5-й день после начала проэструса.
• Когда количество влагалищных эпителиальных клеток, претерпевших ороговение, превысит 80% всех эксфолиированных клеток, следует начинать брать образцы крови для определения сывороточной концентрации прогестерона.
• Рекомендуется брать образцы крови для определения сывороточной концентрации прогестерона каждые 2-3 дня, пока не начнется повышение концентрации, что будет показателем выброса ЛГ или овуляции. Это позволит предсказать оптимальный период для оплодотворения данной суки. Если вы измеряете сывороточную концентрацию прогестерона при помощи тестов ELISA, образцы следует брать ежедневно, пока концентрация не достигнет высших значений (5,0-10,0 нг/мл; 15,5-31,0 нмоль/л).
• Вероятность зачатия повышается при вязке в период с 4-го дня перед по 2-й день после овуляции, а максимальный помет можно получить от вязки на 2-й день после овуляции.
